标题:细胞培养室如何快速杀灭支原体,保证无菌操作
关键词:细胞株支原体污染;如何快速杀灭支原体病菌;杀灭细胞培养室支原体细胞
细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。以上是常见的污染细胞培养的支原体菌群,但能够污染细胞的支原体种类是很多的,国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
各国细胞库支原体污染的统计表,如下:
国家 |
受支原体污染(%) |
报告年度 |
USA-FDA |
15 |
1993(past 30 years) |
USA-ATCC |
15-20 |
1992 |
Japan-(IFO,RIKEN,JCR |
80~30~22 |
1981 1987-1993 1998 |
Germany-DSM |
36 |
1990-1994 |
Argentina |
65 |
1987 |
Israel |
32 |
1986-1993 |
China |
95 |
1990 |
造成支原体高污染率的原因为:
1、支原体size 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um)
2、支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化
3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式
4、细胞流通间缺乏品管,造成实验室间的相互污染
5、研究或操作人员忽略污染问题
而支原体污染了来源:
1、已受污染的细胞
2、操作人员的疏失
3、已受污染的培养基、血清
4、操作环境不良、实验器具不洁等
支原体的污染是目前细胞实验室比较普遍存在的问题,用药物来杀灭支原体虽是一种重要措施,毕竟是一种补救方法,而且清除后,支原体仍可重新污染细胞。
因此,重要的还在于预防,如何有效杀灭实验室空间支原体病菌,保持细胞培养间洁净和严格无菌操作才是重中之重!
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